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COCAS(染色質(zhì)免疫沉淀基因芯片分析)是一款教學(xué)軟件,染色質(zhì)免疫沉淀基因芯片分析ChIP-on-chip軟件包WindowsLinux (requires R 2.6.2 and Java 1.6)Mac OSX (requires R 2.6.2, Java 1.5 and X11) 。時(shí)下互聯(lián)網(wǎng)常用的教育教學(xué)軟件之一,該軟件純綠色免費(fèi)無(wú)毒,請(qǐng)放心使用。
染色體免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法,也稱結(jié)合位點(diǎn)分析法,在過去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。近年來,這種技術(shù)得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術(shù)在染色體基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性,是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病的主要代謝通路的一種非常有效的工具。
它的原理是在保持組蛋白和DNA聯(lián)合的同時(shí),通過運(yùn)用對(duì)應(yīng)于一個(gè)特定組蛋白標(biāo)記的生物抗體,染色質(zhì)被切成很小的片斷,并沉淀下來。IP是利用抗原蛋白質(zhì)和抗體的特異性結(jié)合以及細(xì)菌蛋白質(zhì)的“prorein A”特異性地結(jié)合到免疫球蛋白的FC片段的現(xiàn)象活用開發(fā)出來的方法。目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,beads上的prorein A就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。實(shí)驗(yàn)最需要注意點(diǎn)就是抗體的性質(zhì)?贵w不同和抗原結(jié)合能力也不同,免染能結(jié)合未必能用在IP反應(yīng)。建議仔細(xì)檢查抗體的說明書。特別是多抗的特異性是問題。其次,要注意溶解抗原的緩沖液的性質(zhì)。多數(shù)的抗原是細(xì)胞構(gòu)成的蛋白,特別飾淦髑架蛋白,緩沖液必須要使其溶解。為此,必須使用含有強(qiáng)界面活性劑的緩沖液,盡管它有可能影響一部分抗原抗體的結(jié)合。另一面,如用弱界面活性劑溶解細(xì)胞,就不能充分溶解細(xì)胞蛋白。即便溶解也產(chǎn)生與其它的蛋白結(jié)合的結(jié)果,抗原決定族被封閉,影響與抗體的結(jié)合,即使IP成功,也是很多蛋白與抗體共沉的悲慘結(jié)果。再次,為防止蛋白的分解,修飾,溶解抗原的緩沖液必須加蛋白酶抑制劑,低溫下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每次實(shí)驗(yàn)之前,首先考慮抗體/緩沖液的比例?贵w過少就不能檢出抗原,過多則就不能沉降在beads上,殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原,過多則抗原被稀釋。
真核生物的基因組DNA以染色質(zhì)的形式存在。因此,研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段,通過對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè),從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。CHIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。而且,CHIP與其他方法的結(jié)合,擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍:CHIP與基因芯片相結(jié)合建立的CHIP-on-chip方法已廣泛用于特定反式因子靶基因的高通量篩選;CHIP與體內(nèi)足跡法相結(jié)合,用于尋找反式因子的體內(nèi)結(jié)合位點(diǎn);RNA-CHIP用于研究RNA在基因表達(dá)調(diào)控中的作用。由此可見,隨著CHIP的進(jìn)一步完善,它必將會(huì)在基因表達(dá)調(diào)控研究中發(fā)揮越來越重要的作用。