這是一個關于葉綠素含量測定實驗PPT課件，包括了實驗原理，試劑與材料，實驗步驟，結(jié)果計算，注意事項，思考題等內(nèi)容，實驗二. 葉綠素含量的測定 高等植物光合作用過程中利用的光能是通過葉綠體色素(光合色素)吸收的。葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。在植物光合生理、發(fā)育生理和抗性生理研究中經(jīng)常需要測定葉綠素含量。葉綠素含量也是指導作物栽培生產(chǎn)和選育作物品種的重要指標。一.實驗原理葉綠素不溶于水，溶于有機溶劑，可用多種有機溶劑，如丙酮、乙醇或二甲基亞砜等研磨提取或浸泡提取。葉綠色素在特定提取溶液中對特定波長的光有最大吸收，用分光光度計測定在該波長下葉綠素溶液的吸光度(也稱為光密度)，再根據(jù)葉綠素在該波長下的吸收系數(shù)即可計算葉綠素含量。葉綠素a、b在長波的最大吸收峰分別在663nm、645nm，據(jù)Lamber-Beer 定律，可得濃度C與光密度D間的關系式： D663=82.04Ca +9.27Cb D645=16.75Ca +45.6Cb (濃度單位：g/mL） CA= 12.72D663 – 2.59D645 CB= 22.88D645 – 4.68 D663 CT = 20.29D645 +8.02D663 (濃度單位：mg/L）二. 試劑與材料 2.1 試劑： 丙酮、石英砂、碳酸鈣，歡迎點擊下載葉綠素含量測定實驗PPT課件哦。

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實驗二. 葉綠素含量的測定 高等植物光合作用過程中利用的光能是通過葉綠體色素(光合色素)吸收的。葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。在植物光合生理、發(fā)育生理和抗性生理研究中經(jīng)常需要測定葉綠素含量。葉綠素含量也是指導作物栽培生產(chǎn)和選育作物品種的重要指標。一.實驗原理葉綠素不溶于水，溶于有機溶劑，可用多種有機溶劑，如丙酮、乙醇或二甲基亞砜等研磨提取或浸泡提取。葉綠色素在特定提取溶液中對特定波長的光有最大吸收，用分光光度計測定在該波長下葉綠素溶液的吸光度(也稱為光密度)，再根據(jù)葉綠素在該波長下的吸收系數(shù)即可計算葉綠素含量。 葉綠素a、b在長波的最大吸收峰分別在663nm、645nm，據(jù)Lamber-Beer 定律，可得濃度C與光密度D間的關系式： D663=82.04Ca +9.27Cb D645=16.75Ca +45.6Cb (濃度單位：g/mL） CA= 12.72D663 – 2.59D645 CB= 22.88D645 – 4.68 D663 CT = 20.29D645 +8.02D663 (濃度單位：mg/L）二. 試劑與材料 2.1 試劑： 丙酮、石英砂、碳酸鈣 2.2材料： 水稻、玉米、花生、桑樹等植物的新鮮葉片。 2.3 儀器與器皿： 分光光度計、臺秤、剪刀、研缽、移液管、漏斗、大試管 三. 實驗步驟 1．取樣：清洗葉片并擦干，稱取0.5g葉片，剪碎后放入研缽中。（在正規(guī)實驗中應各重復3次，本實驗為減少乙醇或丙酮向環(huán)境中的排放，故不設重復）。注意取樣時要避開大的葉脈。 2．研磨提�。合蜓欣徶屑尤�96%乙醇或80%丙酮2ml，以及少許CaCO3 (中和酸性，防止葉綠素酯酶分解葉綠素) 和石英砂，研磨成勻漿，至組織變白，在暗處靜止3-5min后，用濾紙過濾到25ml容量瓶中。注意：用滴管吸取96%乙醇或80%丙酮將研缽洗凈，清洗液也要過濾到容量瓶中，并用96%乙醇或80%丙酮沿濾紙的周圍洗脫色素，待濾紙和殘渣全部變白后，用96%乙醇或80%丙酮定容至刻度。 3．讀取吸光度：取厚度為lcm的潔凈比色皿，注意不要用手接觸比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗2~3次，注意清洗時要使清洗液接觸比色皿內(nèi)壁的所有部分，然后將色素提取液倒入比色皿中，液面高度約為比色皿高度的4/5，將撒在比色皿外面的溶液用濾紙吸掉（注意不能擦），再用擦鏡紙擦干擦凈。 4．結(jié)果計算：將645、663、652nm處測得的吸光度代入公式（3）、（4）、（5）、（6）中計算葉綠素a、b濃度和總濃度。再將葉綠素a、b濃度和總濃度代入公式（7）中求出所測材料單位重量或單位面積的葉綠素a、b含量和總含量。 葉片洗凈、吸干、去大葉脈 ↓ 稱0.5g葉用乙醇或丙酮研磨 ↓ 勻漿過濾（用乙醇或丙酮洗研缽及殘渣，合并濾液） ↓ 濾液用乙醇或丙酮定容至25mL ↓ 置分光光度計測定 (注意:不同提取溶劑波長不同) 四. 結(jié)果計算 4.1 結(jié)果計算 C(mg/L)×提取液總量（L）×稀釋倍數(shù) Chl = (mg/g葉) 材料鮮重（g） 4.2 比較分析不同植物的葉綠素含量差異及同種植物在不同生長環(huán)境下Chla/Chlb差異。五. 注意事項注意葉綠素一定要提干凈，避免造成測定誤差 葉綠素初提液體積不要太多，以免浪費試劑，如果濃度太高可進行適當稀釋 注意分光光度計的規(guī)范使用 六. 思考題為什么植物在不同生長環(huán)境下其 Chl含量有差異？ Chla /Chlb有何適應意義？Urb紅軟基地

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