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真 菌 概 述 概 念 真菌(fungus)是一類具有典型細胞核，有核膜和核仁，胞漿內有完整的細胞器，無根、莖、葉，不含葉綠素，無光合色素，細胞壁含幾丁質和纖維素的單細胞或多細胞異養(yǎng)真核細胞型微生物。 真菌概念 真菌(fungus)：真核細胞型微生物 具有典型細胞結構（細胞核、細胞器、細胞壁） 無根、莖、葉，不含葉綠素 細胞壁含幾丁質和（或）纖維素 以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料 能進行有性生殖和（或）無性繁殖 生長緩慢 概 念 真菌分布廣泛，種類繁多，大多數(shù)無害，甚至有利。 有些真菌也是造成動植物病害的病原，與醫(yī)學有關的約數(shù)百種，少數(shù)真菌可以引起人類感染性、中毒性及變態(tài)反應性疾病。 近年來，由于抗菌藥物的廣泛應用和或應用激素、抗癌藥物導致機體免疫功能降低等原因，機會致病真菌感染也明顯增多。 原核細胞型微生物與真核細胞型微生物比較 第一節(jié) 分 類 分 類 真菌門：5個亞門（傳統(tǒng)） 鞭毛菌亞門 接合菌亞門 子囊菌亞門 擔子菌亞門 半知菌亞門 （醫(yī)學相關： 后4個亞門） 最新分類：真菌界：4個門： 接合菌門 擔子菌門 子囊菌門 壺菌門 第二節(jié) 基本特性 一、形態(tài)特性 真菌比細菌大，用普通光學顯微鏡的低倍或高倍鏡就可見。 真菌菌體外有一層堅硬的細胞壁；其細胞膜含固醇而細菌無。 按形態(tài)可將真菌分為單細胞和多細胞兩類。 第二節(jié) 基本特性 單細胞真菌 形態(tài)：圓形或橢圓形，如酵母型和類酵母型真菌。 （1）酵母型真菌：有孢子，無菌絲 菌絲：無 繁殖方式：從母細胞芽生 菌落形態(tài)：與細菌相似 酵母菌在培養(yǎng)基上菌落形態(tài) 單細胞真菌 （2）類酵母型真菌：芽生孢子與假菌絲 菌絲：假菌絲 假 菌 絲：長的芽體可伸進培養(yǎng)基內 繁殖方式：從母細胞芽生 菌落形態(tài)：與酵母型相似，由假菌絲聯(lián)結成假菌絲體，稱為類酵母型菌落 假菌絲 假菌絲：類酵母菌進行出芽生殖時，子母細胞不立即分離而以狹小的面積相連，這種藕節(jié)狀的細胞串為假菌絲。 假菌絲與真菌絲明顯不同處在于其兩細胞間有一細腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細胞寬度一致。 多細胞真菌 由菌絲和孢子兩大部分組成 1.菌絲 (hypha) 2.孢子 (spore) （一）菌絲（hypha) 真菌在適宜環(huán)境中，由孢子出芽長出芽管，逐漸延長呈絲狀，稱為菌絲（hypha）。菌絲繼續(xù)分支，交織成團，稱菌絲體（mycelium）。 菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲中能形成孢子的叫做生殖菌絲。 有些真菌的菌絲具有隔膜，叫有隔菌絲；有些真菌的菌絲無隔膜，叫無隔菌絲。 不同形態(tài)的菌絲具有鑒別意義 (1) 單純菌絲 細長的管狀組織，有粗有細分枝或不分枝，有隔或無隔，有色或無色。 (2) 球拍狀菌絲 菌絲在隔膜部位一端膨大球拍狀，排列規(guī)整。 (3) 破梳狀菌絲 菌絲一側有不規(guī)則的梳齒狀凸起，梳齒參差不齊如破梳狀。 (4) 螺旋狀菌絲 菌絲呈彈簧狀，有規(guī)律性旋轉狀生長。 (5) 結節(jié)狀菌絲 稍膨大的側枝細胞、菌絲端細胞或中間性細胞彎曲成團，互纏成結。 (6) 鹿角狀菌絲 菌絲頂端呈不規(guī)則分枝，狀如鹿角。 （二）孢子(spore) 孢子（spore）是真菌的繁殖結構。孢子分有性與無性兩類。孢子與細菌芽胞不同。 二相真菌：一些真菌可因寄生環(huán)境及培養(yǎng)條件（營養(yǎng)、溫度、氧氣等）的不同而交替形成兩種形態(tài)，即在室溫中呈霉菌型，在37攝氏度或體內呈單細胞的酵母型，這類真菌有雙向性，所以稱之為雙態(tài)真菌或二相真菌。如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。 二相真菌 孢子 (spore) 孢子是生殖結構，由生殖菌絲產生。是鑒定和分類的依據(jù)。 (1) 無性孢子 不經(jīng)過兩性細胞的配合而產生 ，菌絲上的細胞分化或出芽生成，病原性真菌大多形成無性孢子。 (2) 有性孢子 同一菌體或不同菌體上的2個細胞融合經(jīng)減數(shù)分裂形成。絕大多數(shù)為非致病性真菌所具有。 無性孢子分為： 分生孢子：①大分生孢子②小分生孢子 葉狀孢子：①芽生孢子②關節(jié)孢子③厚膜孢子 孢子囊孢子 有性孢子分為： 卵孢子、接合孢子、子囊孢子及擔孢子 無性孢子 1) 葉狀孢子 由菌絲細胞直接形成 ①芽生孢子 通過發(fā)芽方式形成圓形或卵形的細胞 ②關節(jié)孢子 由菌絲分化成長方形的幾個節(jié)段，胞壁稍厚 ③厚膜孢子 是一種休眠細胞，條件適宜可再發(fā)芽  無性孢子 2) 分生孢子 常見的一種無性孢子 形狀、大小、結構、顏色等：分類、鑒定 ① 大分生孢子 體積較大，多細胞性。孢子呈紡錘形，棍棒狀等。 ② 小分生孢子 體積小，單細胞性，外壁薄，球形、卵形、梨形以及棍棒狀等。 無性孢子 3) 孢 (子) 囊孢子 由絲末端形成一種囊狀結構（孢子囊），內有許多孢囊孢子。 多細胞真菌形態(tài) 真菌孢子和細菌芽胞的區(qū)別 繁殖與培養(yǎng) 真菌的繁殖方式 依靠孢子及菌絲進行繁殖:有性繁殖 無性繁殖 無性繁殖 1.芽生: 酵母菌及酵母樣真菌 2.裂殖: 以二分裂法進行繁殖 3.萌管: 萌發(fā)芽管，芽管伸延后形成菌絲 4.隔殖: 在分生孢子梗某一段落形成一隔膜，隨之原生質濃縮而形成一個新的孢子。孢子可再獨立繁殖。 真菌的培養(yǎng)特性 真菌的營養(yǎng)要求不高 常用沙保培養(yǎng)基 ：蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。 溫度：22～28℃，但某些深部感染的真菌為37℃。 pH：4.0～6.0 生長速度:較慢 常用的培養(yǎng)基 沙氏瓊脂培養(yǎng)基Sabouraud's Agar 蛋白胨 10.g  葡萄糖  40.0g  瓊脂  20.0g pH值5.6 ± 0.2     蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。  馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(分離真菌用) 配方KH2PO4 1gMgSO4 7H2O 0.5g 蛋白胨 5g葡萄糖 10g瓊脂 15-20g水 1000mLpH 自然此培養(yǎng)液1000mL加1%孟加拉紅1%水溶液3.3mL.臨用時每100mL培養(yǎng)基中加入1%鏈霉素液0.3mL. 基本原理 葡萄糖主要作為碳源，蛋白胨主要作為氮源，KH2PO4和MgSO4 7H2O作為無機鹽，為微生物提供鉀，磷，鎂離子.而孟加拉紅和鏈霉素主要是細菌和放線菌的抑制劑，對真菌無抑制作用，因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以達到優(yōu)勢生長，從而達到分離真菌的目的. 察氏瓊脂Czapek Dox Agar 硝酸鈉 磷酸氫二鉀 硫酸鎂 氯化鉀 硫酸亞鐵 蔗糖 瓊脂 3.0 1.0 0.5 0.5 0.01 30.0 15.0 孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅培養(yǎng)基）Rose Bengal Medium 蛋白胨  葡萄糖 磷酸二氫鉀 硫酸鎂(無水) 瓊脂  孟加拉紅 氯霉素 5.0 10.0 1.0 0.5  20.0 0.033 0.1 原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須的微量元素；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；氯霉素可抑制細菌的生長；孟加拉紅作為選擇性抑菌劑可抑制細菌的生長，并可減緩某些霉菌因生長過快而導致菌落漫延生長。 真菌的培養(yǎng)特性 在沙保培養(yǎng)基上， 3種類型的菌落： 1.酵母型菌落 ： 菌落柔軟、光滑、濕潤。鏡下可見單細胞性的芽生孢子，無菌絲。隱球菌菌落 2.類酵母型菌落（酵母樣菌落） ： 和酵母型菌落相似，鏡下可見假菌絲。白色念珠菌菌落 3.絲狀型菌落 ： 由多細胞菌絲體組成的絮狀菌落（一部分向空中生長，并形成孢子）。絲狀真菌或霉菌菌落。 (菌落較大) 赭曲霉 鐮刀菌及其大分生孢子 黃曲霉菌落形態(tài) 黃曲霉鏡下特征 青霉菌菌落形態(tài) 青霉菌鏡下形態(tài) 鐮刀菌菌落形態(tài) 鐮刀菌鏡下特征 變異與抵抗力 變異性 多次傳代或孵育過久，容易變異（形態(tài)、結構、菌落性狀、色素以及生理性狀 (毒力)的改變。   抵抗力 熱：不強。孢子一般60℃經(jīng)1h即被殺滅（不同于芽胞）。 干燥、日光、紫外線及多種化學藥物：耐受性較強。 1%～3%石碳酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10甲醛液：較敏感。 三、 致病性 致病物質： 細胞壁糖蛋白（有內毒素樣活性）、毒素、莢膜等。 致病方式： 病原性真菌感染（主要是外源性真菌感染） 條件致病性真菌感染（主要是內源性真菌） 真菌變態(tài)反應性疾病（皮炎、哮喘等） 真菌性中毒（毒素引起） 真菌毒素與腫瘤的關系（黃曲霉毒素等） 真菌性感染 真菌病 (mycoses)： 由真菌引起感染并表現(xiàn)臨床癥狀者   真菌的致病力比細菌弱   致病性真菌、條件致病性真菌 原發(fā)性感染： 球孢子菌(Coccidiodes)、 皮炎芽生菌 (Blastomyoes dermatitidis)、 組織胞漿菌(Histoplasma)等 繼發(fā)性感染： 機體防御機能顯著低下時。   致病機理：真菌的粘附能力，對免疫系統(tǒng)功能的抑制，胞壁中的酶類 真菌性超敏反應 按性質分： ①感染性超敏反應：感染后， Ⅳ型 ②接觸性超敏反應： 吸入或食入， Ⅰ～Ⅳ型 按部位分: ①皮膚超敏反應: 皮炎、濕疹、蕁麻疹、瘙癢癥等 ②呼吸道超敏反應: 支氣管哮喘以及過敏性鼻炎 ③消化道超敏反應 真菌毒素中毒 農作物、食物或飼料上  表現(xiàn): 1. 肝、腎、神經(jīng)、造血系統(tǒng)損傷 2. 致癌性: 黃曲霉毒素，等 （原發(fā)性肝癌） 免 疫 性 免疫力不強，不能形成穩(wěn)固的病后免疫 1. 抗體的作用 2. 細胞免疫及超敏反應 微生物學檢查法 取材：淺部：鱗屑、病發(fā)或甲屑 深部：分泌物、排泄物、體液、 痰液及血液 直接鏡檢： 粘稠或含角質的標本:先加10%KOH，加溫后鏡檢 液體標本：離心后鏡檢 培養(yǎng)： 含抗生素的沙保弱培養(yǎng)基 25℃ (絲狀真菌) 37℃ (酵母型真菌) 3.菌種鑒定 (1)絲狀真菌：根據(jù)菌落形成所需要的時間，在不同條件下生長的情況，菌落表面及背面的形態(tài)、色素，培養(yǎng)基中有無色素， 培養(yǎng)物用乳酚棉藍染色后鏡檢找特征性標志結構。 主要是形態(tài)學的鑒定，如直接涂片觀察，小培養(yǎng)顯微鏡鑒定， 黃曲霉鏡下特征 青霉菌菌落形態(tài) 青霉菌鏡下形態(tài) 鐮刀菌菌落形態(tài) 鐮刀菌鏡下特征 2)酵母菌鑒定： 形態(tài)學鑒定主要觀察有無假菌絲產生，如有則為念珠菌屬，如無則為念珠菌以外的酵母菌;玉米吐溫誘導下特征菌絲及特征孢子的檢驗，血清芽管形成 在形態(tài)學基礎上還必須進行生化鑒定：有標準鑒定，自動儀器鑒定，顯色鑒定，其中，自動儀器鑒定(如API20C，ID32C等)，顯色鑒定對于酵母樣真菌的鑒定，特點是快速簡便; 標準鑒定是按傳統(tǒng)雙歧表流程鑒定(包括糖同化試驗，糖發(fā)酵試驗，CAFC酚氧化酶試驗，尿酶試驗，KNO3同化試驗，脂肪酸需求試驗)，是真菌鑒定的金標準，系統(tǒng)準確，缺點是程序繁瑣，耗時長，與臨床治療不太適應。 血清學玻片凝集試驗，動物致病性實驗， 血清學方法檢測真菌抗原成分     念珠菌感染和曲霉感染的血清學檢測可分為抗體檢測和抗原檢測兩大類；由于發(fā)生侵襲性真菌病的免疫受損宿主往往缺乏可檢測到的抗體，或者抗體的產生變化較 大，因此檢測抗體對于系統(tǒng)性真菌感染的診斷意義不大，而目前用于臨床的血清學檢查主要屬于后者，即檢測血液循環(huán)中的抗原；常用的有下述幾種：         （1）β-D-1，3葡聚糖（BDG）： 是許多真菌細胞壁的主要成份，如念珠菌、曲霉、鐮刀菌等，但不包括隱球菌和接合菌；由于細菌、病毒、哺乳動物無 這種成份，因而在循環(huán)血液中測得時則提示侵襲性真菌感染，目前已經(jīng)有商品化BDG檢測的試劑盒。BDG的檢測，在2小時內可以獲得結果，因此盡管不能區(qū)分 真菌感染的種類，但是仍然具有重要作用，美國FDA已經(jīng)批準Fungitell用于真菌感染的診斷，國內也有相似試劑問世，目前在臨床應用中。 （2）半乳甘露聚糖（GM）： GM是存在于曲霉和青霉細胞壁的一種熱穩(wěn)定的多糖，可用于侵襲性曲霉病的臨床診斷。可以使用血清和支氣管肺泡灌洗液檢測 GM，近來也有人使用尿液和腦脊液等標本檢測。GM檢測的敏感性為29-100%，而其特異性可超過90%。由于GM量的多少與組織中真菌含量密切相關， 因此檢測GM還可以提示疾病的預后。 分子生物學鑒定： 如核酸雜交，DNA探針雜交，PCR擴增序列分析，PCR-SSCP單鏈構象多態(tài)性分析，PCR-RFLP限制性片段長度多態(tài)性分析，PCR-RAPD隨機擴增多態(tài)性分析，PFCG脈沖電泳核型分析等。 防治原則 皮膚癬菌： 注意清潔衛(wèi)生，避免接觸 深部真菌�。喝コ�誘因，提高抵抗力 食物中毒：不食用霉變食品 小 結 真菌的概念、分類、命名、生物學特性及與醫(yī)學相關真菌所致常見疾病。 真菌按形態(tài)分為單細胞和多細胞兩類。真菌細胞壁中缺乏肽聚糖，而含大分子幾丁質，故其不受青霉素或頭胞菌素的作用。 真菌的營養(yǎng)要求不高，易于培養(yǎng)。 真菌可以引起人類感染性、中毒性及變態(tài)反應性疾病。條件致病性真菌感染近年來明顯上升，這與臨床上濫用抗菌藥物、應用激素及免疫抑制劑和抗癌藥物等導致機體免疫功能下降有關，已引起臨床關注。 真菌的鑒定以形態(tài)學為主，單細胞真菌輔以生化及血清學鑒定TO3紅軟基地

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