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實驗六微生物的分離純化與接種技術(shù) 一、實驗?zāi)康?1.掌握常用接種工具的使用 2.掌握斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基接種法 3.掌握倒平板技術(shù) 4.掌握各種分離單菌落的技術(shù) 二、實驗原理 三、實驗器材及試劑 接種環(huán)、酒精燈、試管、移液管、培養(yǎng)皿、涂布棒、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、生理鹽水、大腸桿菌菌液。 四、實驗步驟 1. 接種環(huán)的使用 接種環(huán)是用鉑絲或細(xì)電爐絲制成的，使用前后都要用酒精燈外焰嚴(yán)格滅菌。 四、實驗步驟 2. 斜面接種（每人接種2支試管斜面，1支斜面接斜面，1支液體接斜面） 將菌種管（若是液體菌種應(yīng)先搖勻）與空白斜面培養(yǎng)基管握在左手大拇指和其他四指之間，菌種管位于上側(cè)，培養(yǎng)基管位于下側(cè)，斜面均向上。 右手持接種環(huán)火焰滅菌。以右手掌心、小指和無名指同時夾取兩管口的棉塞，將兩試管口迅速通過火焰滅菌。 在火焰附近，用滅菌的接種環(huán)從菌種管挑取少量菌苔或一環(huán)菌液，伸進(jìn)待接種的培養(yǎng)基管斜面底部，向上“Z”形劃線。接種時不要劃破培養(yǎng)基表面，沾菌的接種環(huán)進(jìn)出試管時不應(yīng)觸及試管口。 接種完后灼燒管口，塞上棉塞。灼燒接種環(huán)，放回原處。 將接種好的試管斜面放到37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。 四、實驗步驟 四、實驗步驟 4. 倒平板（每組倒6或8塊營養(yǎng)瓊脂平板） （1）熔化培養(yǎng)基：電爐加熱熔化120mL（或160mL）那瓶營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（電爐加熱時人要在旁邊看著，防止培養(yǎng)基爆沸�。�。 （2）倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右（用手抓瓶子不燙手）后，取無菌培養(yǎng)皿，每皿倒入15～20mL培養(yǎng)基（自然鋪滿整個底面為準(zhǔn)），等凝固后備用。 四、實驗步驟 四、實驗步驟 5. 瓊脂平板劃線分離法 瓊脂平板劃線分離的方法一般有連續(xù)劃線分離法和分區(qū)劃線分離法。 （1）連續(xù)劃線分離法（每人劃1塊營養(yǎng)瓊脂平板） a.滅菌接種環(huán)，冷卻后取適量混勻的菌液。 b.在培養(yǎng)基表面連續(xù)“之”字形劃線，直至劃完整個平板表面。 四、實驗步驟 四、實驗步驟 （2）分區(qū)劃線分離法（每人劃1塊營養(yǎng)瓊脂平板） a. 滅菌接種環(huán)。 b. 冷卻后，蘸取少許混勻的菌液，劃線于平板培養(yǎng)基表面a處。 c. 再將接種環(huán)滅菌。 d. 冷卻后，從a處將菌劃出至b處。 e. 接種環(huán)再次滅菌。 f. 從b處劃出至c處。 g. 再次滅菌接種環(huán)。 h. 從c處劃出至d處。 i. 將平皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。 四、實驗步驟 四、實驗步驟 四、實驗步驟 6. 稀釋涂布法（每組稀釋10-2，10-3，10-4稀釋度菌液各涂布1塊平板） （1）倒平板：電爐加熱熔化其中一瓶60 mL營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右（用手抓瓶子不燙手）后，取3個無菌培養(yǎng)皿，每皿倒入15～20mL培養(yǎng)基（自然鋪滿整個底面為準(zhǔn)），等凝固后備用。 （2）取4支裝有9mL無菌生理鹽水的試管，依次編號10-1，10-2，10-3，10-4，再取3個倒好營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板，分別編號10-2，10-3，10-4 。 四、實驗步驟 （3）稀釋菌液。取1支無菌移液管，按無菌操作的方法吸取1mL菌液于10-1試管中。另取1支無菌移液管，在10-1中吹吸數(shù)次，混勻后吸取1mL菌液至10-2管中。另取1支無菌移液管，在10-2中吹吸數(shù)次，混勻后吸取1mL菌液至10-3管中。另取1支無菌移液管，在10-3中吹吸數(shù)次，混勻后吸取1mL菌液至10-4管中。（注意移液管不能混用） 四、實驗步驟 （4）用無菌移液管分別吸取10-2，10-3，10-4三個稀釋度的菌液各0.1mL，加入相應(yīng)編號的營養(yǎng)瓊脂平板中。（注意移液管不能混用） （5）用無菌涂布棒涂抹均勻。（涂抹不同稀釋度菌液要用不同的涂布棒） （6）等菌液吸收進(jìn)培養(yǎng)基后將平板倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。 四、實驗步驟 四、實驗步驟 四、實驗步驟 四、實驗步驟 五、注意事項 六、思考題Ht7紅軟基地

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