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微生物限度檢查法(2) 控制菌檢查方法的驗證 控制菌檢查方法的驗證 確認所采用的方法適合于該藥品的控制菌檢查 若藥品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結(jié)果時，檢查方法應(yīng)重新驗證 驗證時，依各品種項下微生物限度標準中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗證的菌株 試驗菌液：10-100cfu/ml生理鹽水的菌懸液 驗證方法及結(jié)果判斷 試驗組: 供試液＋試驗菌→ (依相應(yīng)控制菌檢查法檢查) 檢出試驗菌 陰性菌對照組:目的 驗證方法的專屬性。大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌采用金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌采用大腸埃希菌→不得檢出 若試驗組未檢出試驗菌→應(yīng)消除抑菌活性 消除抑菌活性的方法應(yīng)根據(jù)供試品性質(zhì)檢驗?zāi)康模?試驗菌的性質(zhì)消除抑菌活性的方法 應(yīng)根據(jù)供試品性質(zhì)，檢驗?zāi)康模? 試驗菌的性質(zhì)及檢驗條件等通過試驗確定及檢驗條件等通過試驗確定 1.培養(yǎng)基稀釋法 供試品加稀釋劑稀釋到一定倍數(shù)后進行檢驗（雖然供試品中污染的菌也稀釋，但由于檢驗結(jié)果規(guī)定是不得檢出，因而有些品種用稀釋法可檢出目的菌）。 如百喘朋片[1：10 稀釋液3ml 結(jié)果（＋）試驗菌28-96個] 。 本法適用于一般抑菌作用不強的中西藥品。  低速離心（500轉(zhuǎn)/分5分鐘）取上清液（棄取抑菌成分的固體微粒） 高速離心（3000-3500轉(zhuǎn)/分30分鐘）棄去上層抑菌的液體部分，留管底2ml。 本法適用于抑菌作用不強的中西藥品，如：平喘胺片 、速效感冒片（先低速，后高速）；小兒驚風散（低速離心）。本法操作較煩瑣，藥品中污染的微生物有一定的損失。 3.薄膜過濾法 本法適用于有抑菌作用的液體制劑。 如：葡萄糖酸洗必泰含漱劑，氯霉素滴眼 劑等。 注意：供試液應(yīng)加入較多量的稀釋液稀釋后，再注入濾器中。 4.中和法 ①磺胺類可加對氨基苯甲酸（100ml增菌培養(yǎng)基中含1%對氨基苯甲酸0.5-1.0ml）如：復(fù)方新諾明片 ②含重金屬鹽類可用含巰基化合物（硫乙醇酸鈉，L-胱氨酸）的培養(yǎng)基作增菌培養(yǎng)液。如：磺胺嘧啶銀軟膏-金黃色葡萄球菌與綠膿桿菌的檢驗 ③脂溶性藥物用表面活性劑中和。如：復(fù)方痔瘡栓（含洗必泰）中的綠膿桿菌的檢驗，僅用吐溫-80制備供試液即可 5.聯(lián)合使用 適用于抑菌作用較強的中西藥制劑。 如：①復(fù)方洗必泰栓（水溶性基質(zhì)）金黃色葡萄球菌的檢驗—用1%吐溫-80稀釋液制備供試液＋膜法過濾＋濾膜置含5%吐溫-80的硫乙醇酸鹽增菌液中→（+）；②生白安片（含鹽酸小檗胺）大腸桿菌檢驗—低速離心＋薄膜過濾法→（+）。E9x紅軟基地

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